PDX模型構(gòu)建方法

首先腫瘤組織標(biāo)本應(yīng)在含有胎牛血清（FBS）、青霉su/鏈霉su的冷溶液中制備，以提高移植的成功率。PDX所用的腫瘤組織有兩種形式，病人腫瘤組織切成的2-3mm3碎片或者單細(xì)胞懸液。腫瘤標(biāo)本在移植前用上述溶液洗滌三次。在4-8周齡免疫缺陷小鼠的下背部創(chuàng)建小切口用于皮下移植，并將腫瘤組織樣本移植到手術(shù)區(qū)域。當(dāng)腫瘤大小達(dá)到1-2cm3時意味著移植成功，平均需要2-4個月，如果在6個月內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)腫瘤，移植就沒有成功。移植瘤長到足夠大時可以再解剖重新移植到其他小鼠，第一代為F1，第二、三代為F2、F3。第三代（F3）及以上小鼠可用于藥物治療研究。

 構(gòu)建PDX模型的步驟

位置選擇

PDX移植效率因腫瘤類型、植入部位、腫瘤侵襲性和受體小鼠類型而異，腫瘤組織可以移植到腎包膜下、皮下、原位。一般來說，皮下和原位部位都是常用的。皮下移植：皮下移植是目前常用的移植手段，這種模型提供了腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性，很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，而且較好地模擬了最初的腫瘤微環(huán)境。腫瘤植于皮下，易于觀察和測量腫瘤的生長情況，操作相對簡單，技術(shù)難度不高。對于消化系統(tǒng)腫瘤，如結(jié)腸癌、胃癌和食管癌等，皮下移植往往有較高的成功率。腎包膜下移植：腎包膜下具有豐富的血管結(jié)構(gòu)，能夠提供充足的營養(yǎng)、激素和氧氣促進早期腫瘤組織生長，并保留原發(fā)腫瘤的異質(zhì)性和遺傳特征，可以極大地提高腫瘤移植的成功率。但是缺點是對實驗人員有很高要求，需要豐富的外科手su經(jīng)驗。此外，腫瘤的大小不易觀察和測量。原位移植：原位異體移植PDX模型（PDOX）可以產(chǎn)生轉(zhuǎn)移，準(zhǔn)確模擬原發(fā)腫瘤的自然環(huán)境，通常用于轉(zhuǎn)移瘤的研究。

小鼠選擇

PDX模型的受體是具有免疫缺陷的小鼠，目前常見的可用于PDX模型的小鼠品系有四種，其各自特點如下：裸鼠：裸鼠（nude mice）無胸腺，缺乏成熟的T細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞功能較低，免疫球蛋白G含量低下，因此具有較低的免疫力，移植排斥少。SCID小鼠：SCID小鼠是由于第16號染色體上的隱性基因發(fā)生突變而產(chǎn)生的。