簡要描述:原位雜交實驗將標記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交。用原位雜交技術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節(jié)機制。細胞原位雜交技術服務已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
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原位雜交實驗步驟:前期胚胎的制備。
原位雜交**天進行重新水化和固定、預雜交、雜交。
原位雜交第二天進行1將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)2加入50%甲酰按/2XSSCT溶液1量升,60℃,放置30分鐘,重復一次。3署換2XSSCT1ml,60°℃,放置15分鐘。4詈換0.2XsSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復一次。5用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動。6室溫下加1ml 1:2:7溶液,時間為一小時。7 按1:3000的比例在1∶2:7溶液中加入酶連**抗體,40冰箱過夜。
原位雜交第三天進行1)用1ml含10%熱滅**清的MABT溶液置換抗體溶液,放置搖床上25分鐘,然后用1mIMABT置換,25分鐘,再用1mIMABT溶液詈換,一小時以上,后用1mIMABT溶液置換,25分鐘。2用1ml 1mM米勝的Staining buffer洗一次,每次放置五分鐘。3)將胚胎轉入十六孔板中,吸去stainingbuffer,加上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加5mM米唑),十六孔板外面包,上錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯色。4)每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色5)將顯色的胚胎中的底物吸出,用
我們擁有專業(yè)的實驗室、精良的實驗設備和經(jīng)驗豐富的科研技術人員。技術團隊包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學、轉錄組學、蛋白質組學、代謝組學、生物化學、病理檢測、基因檢測等技術在科研中的應用與推廣。通過高度細分、較好的的服務平臺,為廣大客戶提供了完善的技術解決方案和服務。目前,及,涉及臨床醫(yī)學、腫瘤生物學、免疫學、細胞生物學、分子生物學等生命科學、醫(yī)學等諸多領域。
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