簡要描述:在細(xì)胞凋亡的過程中往往伴隨著線粒體跨膜電位的破壞,這被廣泛認(rèn)為是細(xì)胞凋亡過程中早發(fā)生的事件之一。線粒體膜電位檢測的有很多方法,JC-1的流式檢測是比較常見的一種方法。
產(chǎn)品分類
Product Category詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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一、服務(wù)介紹
大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān),其中線粒體跨膜電位(MMP)的下降,被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級聯(lián)反應(yīng)過程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征(染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂)出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。
二、實驗原理
JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料,可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細(xì)胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在,分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當(dāng)JC-1濃度低或膜電位水平低時,主要以單體形式存在,激發(fā)波長為527nm,呈綠色熒光;當(dāng)JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時,形成聚合物,發(fā)出紅色的熒光,激發(fā)波長為590nm。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時,線粒體跨膜電位被去極化,JC-1從線粒體內(nèi)釋放,紅光強(qiáng)度減弱,以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光,根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。
三、實驗流程
1.細(xì)胞培養(yǎng);
2.用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時設(shè)立陰性依照組合陽性對照組,收集細(xì)胞;
3.用PBS洗滌細(xì)胞三次,收集不多于1×106的細(xì)胞;
4.取100μL10×IncubationBuffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×IncubationBuffer,混勻并預(yù)熱至37℃;
5.吸取500μL1×IncubationBuffer,加入1μLJC-1,渦旋混勻配成JC-1工作液;
6.取500μLJC-1工作液將細(xì)胞均勻懸浮,37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。
7.室溫離心(2000rpm,5min)收集細(xì)胞,用1×IncubationBuffer洗兩次;
8.吸取500μL10×IncubationBuffer重新懸浮細(xì)胞;
9.流式細(xì)胞儀檢測,分析。
四、客戶提供
細(xì)胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細(xì)胞),相關(guān)藥品或MMP檢測試劑盒(可代購)!
五、公司提供
實驗步驟、結(jié)果圖、數(shù)據(jù)結(jié)果和分析報告
實驗周期:1-2周,具體需要根據(jù)細(xì)胞生長情況及實驗內(nèi)容而定。
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