小鼠脾臟單細(xì)胞懸液的制備方法
更新時(shí)間:2024-06-14 點(diǎn)擊次數(shù):751
1. 8周齡C57BL/6小鼠摘眼球放血。
2. 在75%的酒精中,浸泡5min。
3. 無菌狀態(tài)下取脾臟。
4. 取一干凈10cm大皿,放入無菌的70um濾網(wǎng),將脾臟置于濾網(wǎng)上,加入2ml培養(yǎng)基。
5. 用研磨棒輕輕研磨臟器,將脾臟組織研磨成單細(xì)胞狀態(tài),直到只剩下臟器的結(jié)締組織為止。
6. 研磨時(shí)動作應(yīng)輕柔,用力過大可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
7. 棄去濾網(wǎng)和濾網(wǎng)上的結(jié)締組織,收集平皿內(nèi)的細(xì)胞懸液,400g4min離心沉淀。
8. 用PBS重懸沉淀,就可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。